Biuret法是一種常用的蛋白質(zhì)含量測(cè)定方法，通過其與蛋白質(zhì)結(jié)合產(chǎn)生的顏色反應(yīng)來測(cè)定蛋白質(zhì)的含量。

樣品制備：首先，需要將待測(cè)的蛋白質(zhì)樣品制備成適當(dāng)?shù)娜芤骸ＭǔＧ闆r下，將蛋白質(zhì)溶解在適當(dāng)?shù)木彌_液中，以確保反應(yīng)的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性。

加入試劑：將樣品溶液加入到含有Biuret試劑的試管或反應(yīng)皿中。Biuret試劑通常由堿性銅溶液和鈉鉀氫氧化物組成。

反應(yīng)產(chǎn)生：當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)與Biuret試劑反應(yīng)時(shí)，會(huì)產(chǎn)生紫色的絡(luò)合物。這是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)中的蛋白質(zhì)質(zhì)量大約為200個(gè)氨基酸殘基，而Biuret試劑中的銅離子與蛋白質(zhì)中的兩個(gè)或更多的肽鍵結(jié)合形成絡(luò)合物，從而產(chǎn)生紫色的化合物。

測(cè)定吸光度：將反應(yīng)產(chǎn)物的吸光度測(cè)定在特定波長(zhǎng)下，通常在540nm左右。吸光度與蛋白質(zhì)的濃度成正比，因此可以通過吸光度的測(cè)定來間接測(cè)定蛋白質(zhì)的含量。

對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線：為了確定樣品中蛋白質(zhì)的含量，通常需要制備一系列已知濃度的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，測(cè)定它們的吸光度，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后，將待測(cè)樣品的吸光度與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，從而確定樣品中蛋白質(zhì)的含量。